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【PPT】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：沙漠雪狼
資源分類：藥物 - 臨床藥學(xué)
資源屬性：PPT
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上傳日期：2012-12-27 09:22:44

【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】金黃色葡萄球菌檢驗 概況 葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個菌種，從人體上可檢出12個種。 葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動物的條件致病菌?！緋pt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化膿性球菌。 金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性 形態(tài)與染色： 金黃色葡萄球菌的典型形態(tài)呈球形，直徑0.4～1.2?m，大小不一，平均直徑約為0.8?m。 革蘭氏染色陽性，呈葡萄串狀排列。無鞭毛、無芽胞。在陳舊培養(yǎng)物中，衰老的菌體常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。 【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 培養(yǎng)特性： 易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。 需氧或兼性厭氧。 最適生長溫度37℃，最適生長pH 7.4。耐鹽性強(qiáng)，在含10～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。 在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落。可產(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培養(yǎng)中。 在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血。 可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。 大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、 VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽性。 金黃色葡萄球菌的酶 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生血漿凝固酶和耐熱DNA酶。這兩種酶均與金黃色葡萄球菌的致病性有關(guān)。 血漿凝固酶：與金黃色葡萄球菌的致病力密切相關(guān)。一般認(rèn)為，血漿凝固陽性的金黃色葡萄球菌菌株有致病力。否則為無力的菌株。血漿凝固酶對熱穩(wěn)定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。 耐熱DNA酶作為除血漿凝固酶外鑒定金黃色葡萄球菌致病力的指標(biāo)之一。該酶的最適pH為9.0。【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因為食品污染了金黃葡萄球菌后，由細(xì)菌產(chǎn)生大量腸毒素而導(dǎo)致的。 近年報導(dǎo)表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實驗室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。 腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個無分支的肽鏈組成。分子量約為3000左右。易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。 耐熱，經(jīng)100℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強(qiáng)，一般烹調(diào)溫度不能將其破壞。218~248 ℃的油中需30min才能被破壞?？梢鸺毙晕改c炎。 根據(jù)腸毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E 5 個型。A型腸毒素引起的食物中毒較多，約占50%左右。其他依次為D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。 A型腸毒素毒力較強(qiáng)，攝入1μg即可引起中毒；B型毒力較弱攝入25μg，才引起中毒。一般認(rèn)為引起人中毒的最小劑量是1.0~7.2μg/kg。 金黃色葡萄球菌的檢測程序 增菌培養(yǎng)基【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 7.5%氯化鈉肉湯：為葡萄球菌選擇性增菌培養(yǎng)基，因金黃色葡萄球有耐受高鹽的特性，因而能在此增菌液中生長，除某些嗜高鹽的海洋菌外，大多數(shù)細(xì)菌都被增菌液中的高鹽所抑制。 胰酪胨大豆肉湯：含氯化鈉達(dá)10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氫二鉀和葡萄糖促進(jìn)葡萄球菌的生長。 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取25g樣品至盛有225 mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000 r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225 mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。 液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。 增菌與分離培養(yǎng) 增菌培養(yǎng)：吸取5mL上述樣品勻液，接種于50mL 7.5%氯化鈉肉湯或10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長，污染嚴(yán)重時在10%胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。 將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h或45h～48h。 分離培養(yǎng)基 Baird-Parker瓊脂：培養(yǎng)基中含有卵黃亞碲酸鉀，能抑制大多數(shù)細(xì)菌的繁殖，并能促進(jìn)金黃色葡萄球菌的生長使其產(chǎn)生黑色和暈圈。培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉和甘氨酸也能促進(jìn)金黃色葡萄球菌的生長。【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶爾可見無混濁帶和透明圈的非典型菌落。 長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。 分離培養(yǎng)基 血瓊脂：是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有5%的脫纖維血(羊血或兔血)。用于觀察金黃色葡萄球菌的溶血現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上呈β溶血。 金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。 革蘭氏染色 血漿凝固酶試驗 試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著于細(xì)菌表面 ，產(chǎn)生凝固。 金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細(xì)胞壁結(jié)合的凝固酶，為結(jié)合凝固酶；另一種是菌細(xì)胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。 血漿凝固酶試驗 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mL BHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18 h～24 h。 取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽性結(jié)果。 同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。 結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mL BHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復(fù)實驗。 【ppt】金黃色葡萄球菌檢驗【23頁P(yáng)PT課件】 結(jié)果報告 如血漿凝固酶試驗陽性，可判定為金黃色葡萄球菌 。 報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。 謝謝!

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