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【DOC】金黃色葡萄球菌檢測方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：沙漠雪狼
資源分類：藥物 - 臨床藥學(xué)
資源屬性：文檔
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上傳日期：2012-12-27 09:27:48

金黃色葡萄球菌檢測方法 一．材料與方法 【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法1、材料 ①培養(yǎng)基：7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，血瓊脂平板培養(yǎng)基（按常規(guī)方法制作） ②試劑：7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，革蘭氏染色，血瓊脂平板，Baird-Parker瓊脂平板，生理鹽水，兔血漿（1：4），【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 ③器材：溫箱，顯微鏡，天平，均質(zhì)器，載玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，試管及試管架，研磨，1ml注射器， ④實驗動物：健康的小白鼠 2、方法 待檢樣品25g+225ml滅菌生理鹽水 　　　　　　　　　　　　　　　　　　│ 　　　　　　　　　　　　┌─────┴─────┐ 　　　　　　　　　　直接計數(shù)法 增菌培養(yǎng)方法 　　　　　↓　　　　　　　　　　　↓ Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基 ↓　　　　　　　　　　　↓ 血平板 血平板 　　　　　└─────┰─────┘ 　　　　　　　　　　　↓ ┌─────┰─────┰──────┐ ↓　　　　　↓　　　　　↓　　　　　　↓ 涂片染色鏡 溶血觀察　動物接種試驗 血漿凝固試驗 └─────┴──┯──┴──────┘ 　　　　　　　　↓ 報告 1、樣品的采集 稱取25g火腿腸，切碎攪勻（用滅菌研缽研磨），置于250ml錐形瓶中，加入225ml滅菌生理鹽水，制成1：10樣品混懸液，混勻后作用20分鐘，隨機取10ml離心。 2、增菌及分離培養(yǎng) ①增菌培養(yǎng)方法：吸取5ml上清液，接種于7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，置于（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h，劃線接種入血平板，（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h?！綿oc】金黃色葡萄球菌檢測方法 ②直接計數(shù)方法：吸取上述懸液，進行10倍遞增稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液各1ml，分別加入3個Baird-Parker瓊脂平板，每個平板的接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml。用滅菌L型涂布棒涂布整個平板，置于（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h。之后分別對3個平板上生長的周圍有渾濁帶的黑色菌落進行計數(shù)。轉(zhuǎn)接入血平板，（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h。 3、涂片、染色與鏡檢 將純培養(yǎng)的未知菌涂片，革蘭氏染色，顯微鏡觀察。 4、生化實驗 ①觸酶試驗 在載玻片上滴1滴3%的過氧化氫，調(diào)取純化的細(xì)菌放在過氧化氫中觀察變化。30s內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 ②血漿凝固酶試驗【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 吸取1：4新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的2①中的肉湯培養(yǎng)液0.5ml，搖蕩均勻，放入（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)，每0.5h觀察一次，觀察6h，檢查是否出現(xiàn)凝固。將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊狀，可判定為陽性，同時以已知陽性葡糖球菌和陰性肉湯作為對照。 5、動物感染實驗 用無菌生理鹽水將2①中血瓊脂板上純化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠體內(nèi)，同時用滅菌生理鹽水注射入另外的小白鼠體內(nèi)，以做對照，分別在相同條件飼養(yǎng)，觀察其癥狀。對感染試驗出現(xiàn)癥狀或死亡的小白鼠進行剖檢，并采集病料，進行分離。 二．結(jié)果與分析 1、培養(yǎng)特性及形態(tài)特征 ①培養(yǎng)特性 在37℃條件下，需氧與厭氧培養(yǎng)的血液營養(yǎng)瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，并且有β溶血現(xiàn)象。 ②鏡檢結(jié)果 顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄串狀，也有個別2個或3個球菌相連。根據(jù)菌落形態(tài)、鏡檢結(jié)果懷疑該菌為葡萄球菌。 2、菌落計數(shù)報告【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 將直接計數(shù)法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶試驗陽性數(shù)，除以5，在乘以稀釋倍數(shù)，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)量。 3、動物感染試驗 只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內(nèi)死亡。將死亡的小白鼠剖檢采集病料，進行細(xì)菌分離和生化試驗，得到與原分離菌。 【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法

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