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【DOC】金黃色葡萄球菌檢測方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載

2013-08-04 05:00 閱讀:260 來源:愛愛醫(yī) 責(zé)任編輯:愛愛醫(yī)資源網(wǎng)
[導(dǎo)讀] 【DOC】金黃色葡萄球菌檢測方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載 資源作者:沙漠雪狼 資源分類:藥物 - 臨床藥學(xué) 資源屬性:文檔 資源售價:1 愛醫(yī)幣 資源大?。?.02M 關(guān)注入數(shù):350 人次 評論人數(shù):0
【DOC】金黃色葡萄球菌檢測方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者:沙漠雪狼
資源分類:藥物 - 臨床藥學(xué)
資源屬性:文檔
資源售價:1 愛醫(yī)幣
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上傳日期:2012-12-27 09:27:48
金黃色葡萄球菌檢測方法 一.材料與方法 【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法1、材料 ①培養(yǎng)基:7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基,血瓊脂平板培養(yǎng)基(按常規(guī)方法制作) ②試劑:7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基,革蘭氏染色,血瓊脂平板,Baird-Parker瓊脂平板,生理鹽水,兔血漿(1:4),【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 ③器材:溫箱,顯微鏡,天平,均質(zhì)器,載玻片,L型涂片棒,三角瓶,刻度吸管,平皿,試管及試管架,研磨,1ml注射器, ④實驗動物:健康的小白鼠 2、方法 待檢樣品25g+225ml滅菌生理鹽水                   │             ┌─────┴─────┐           直接計數(shù)法 增菌培養(yǎng)方法      ↓           ↓ Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基 ↓           ↓ 血平板 血平板      └─────┰─────┘            ↓ ┌─────┰─────┰──────┐ ↓     ↓     ↓      ↓ 涂片染色鏡 溶血觀察 動物接種試驗 血漿凝固試驗 └─────┴──┯──┴──────┘         ↓ 報告 1、樣品的采集 稱取25g火腿腸,切碎攪勻(用滅菌研缽研磨),置于250ml錐形瓶中,加入225ml滅菌生理鹽水,制成1:10樣品混懸液,混勻后作用20分鐘,隨機取10ml離心。 2、增菌及分離培養(yǎng) ①增菌培養(yǎng)方法:吸取5ml上清液,接種于7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基內(nèi),置于(37±1℃)恒溫箱中培養(yǎng)24h,劃線接種入血平板,(37±1℃)恒溫箱中培養(yǎng)24h?!綿oc】金黃色葡萄球菌檢測方法 ②直接計數(shù)方法:吸取上述懸液,進行10倍遞增稀釋,根據(jù)樣品污染情況,選擇不同濃度的稀釋液各1ml,分別加入3個Baird-Parker瓊脂平板,每個平板的接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml。用滅菌L型涂布棒涂布整個平板,置于(37±1℃)恒溫箱中培養(yǎng)24h。之后分別對3個平板上生長的周圍有渾濁帶的黑色菌落進行計數(shù)。轉(zhuǎn)接入血平板,(37±1℃)恒溫箱中培養(yǎng)24h。 3、涂片、染色與鏡檢 將純培養(yǎng)的未知菌涂片,革蘭氏染色,顯微鏡觀察。 4、生化實驗 ①觸酶試驗 在載玻片上滴1滴3%的過氧化氫,調(diào)取純化的細(xì)菌放在過氧化氫中觀察變化。30s內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽性,不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 ②血漿凝固酶試驗【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 吸取1:4新鮮兔血漿0.5ml,放入小試管中,再加入培養(yǎng)24h的2①中的肉湯培養(yǎng)液0.5ml,搖蕩均勻,放入(37±1℃)恒溫箱中培養(yǎng),每0.5h觀察一次,觀察6h,檢查是否出現(xiàn)凝固。將試管傾斜或倒置時,呈現(xiàn)凝塊狀,可判定為陽性,同時以已知陽性葡糖球菌和陰性肉湯作為對照。 5、動物感染實驗 用無菌生理鹽水將2①中血瓊脂板上純化的菌落洗下后,以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠體內(nèi),同時用滅菌生理鹽水注射入另外的小白鼠體內(nèi),以做對照,分別在相同條件飼養(yǎng),觀察其癥狀。對感染試驗出現(xiàn)癥狀或死亡的小白鼠進行剖檢,并采集病料,進行分離。 二.結(jié)果與分析 1、培養(yǎng)特性及形態(tài)特征 ①培養(yǎng)特性 在37℃條件下,需氧與厭氧培養(yǎng)的血液營養(yǎng)瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起,約1mm大小的金黃色菌落,并且有β溶血現(xiàn)象。 ②鏡檢結(jié)果 顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌,排列成葡萄串狀,也有個別2個或3個球菌相連。根據(jù)菌落形態(tài)、鏡檢結(jié)果懷疑該菌為葡萄球菌。 2、菌落計數(shù)報告【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法 將直接計數(shù)法試驗中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數(shù)相加,乘以血漿凝固酶試驗陽性數(shù),除以5,在乘以稀釋倍數(shù),即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)量。 3、動物感染試驗 只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化:接種分離菌的小白鼠在9h內(nèi)死亡。將死亡的小白鼠剖檢采集病料,進行細(xì)菌分離和生化試驗,得到與原分離菌。 【doc】金黃色葡萄球菌檢測方法
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