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【DOC】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：沙漠雪狼
資源分類(lèi)：藥物 - 臨床藥學(xué)
資源屬性：文檔
資源售價(jià)：1 愛(ài)醫(yī)幣
資源大小：0.02M
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上傳日期：2012-12-27 09:27:48

金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 一．材料與方法 【doc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法1、材料 ①培養(yǎng)基：7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，血瓊脂平板培養(yǎng)基（按常規(guī)方法制作） ②試劑：7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，革蘭氏染色，血瓊脂平板，Baird-Parker瓊脂平板，生理鹽水，兔血漿（1：4），【doc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 ③器材：溫箱，顯微鏡，天平，均質(zhì)器，載玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，試管及試管架，研磨，1ml注射器， ④實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康的小白鼠 2、方法 待檢樣品25g+225ml滅菌生理鹽水 　　　　　　　　　　　　　　　　　　│ 　　　　　　　　　　　　┌─────┴─────┐ 　　　　　　　　　　直接計(jì)數(shù)法 增菌培養(yǎng)方法 　　　　　↓　　　　　　　　　　　↓ Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基 ↓　　　　　　　　　　　↓ 血平板 血平板 　　　　　└─────┰─────┘ 　　　　　　　　　　　↓ ┌─────┰─────┰──────┐ ↓　　　　　↓　　　　　↓　　　　　　↓ 涂片染色鏡 溶血觀察　動(dòng)物接種試驗(yàn) 血漿凝固試驗(yàn) └─────┴──┯──┴──────┘ 　　　　　　　　↓ 報(bào)告 1、樣品的采集 稱(chēng)取25g火腿腸，切碎攪勻（用滅菌研缽研磨），置于250ml錐形瓶中，加入225ml滅菌生理鹽水，制成1：10樣品混懸液，混勻后作用20分鐘，隨機(jī)取10ml離心。 2、增菌及分離培養(yǎng) ①增菌培養(yǎng)方法：吸取5ml上清液，接種于7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，置于（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h，劃線接種入血平板，（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h?！綿oc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 ②直接計(jì)數(shù)方法：吸取上述懸液，進(jìn)行10倍遞增稀釋?zhuān)鶕?jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液各1ml，分別加入3個(gè)Baird-Parker瓊脂平板，每個(gè)平板的接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml。用滅菌L型涂布棒涂布整個(gè)平板，置于（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h。之后分別對(duì)3個(gè)平板上生長(zhǎng)的周?chē)袦啙釒У暮谏溥M(jìn)行計(jì)數(shù)。轉(zhuǎn)接入血平板，（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)24h。 3、涂片、染色與鏡檢 將純培養(yǎng)的未知菌涂片，革蘭氏染色，顯微鏡觀察。 4、生化實(shí)驗(yàn) ①觸酶試驗(yàn) 在載玻片上滴1滴3%的過(guò)氧化氫，調(diào)取純化的細(xì)菌放在過(guò)氧化氫中觀察變化。30s內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽(yáng)性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 ②血漿凝固酶試驗(yàn)【doc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 吸取1：4新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的2①中的肉湯培養(yǎng)液0.5ml，搖蕩均勻，放入（37±1℃）恒溫箱中培養(yǎng)，每0.5h觀察一次，觀察6h，檢查是否出現(xiàn)凝固。將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊狀，可判定為陽(yáng)性，同時(shí)以已知陽(yáng)性葡糖球菌和陰性肉湯作為對(duì)照。 5、動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn) 用無(wú)菌生理鹽水將2①中血瓊脂板上純化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠體內(nèi)，同時(shí)用滅菌生理鹽水注射入另外的小白鼠體內(nèi)，以做對(duì)照，分別在相同條件飼養(yǎng)，觀察其癥狀。對(duì)感染試驗(yàn)出現(xiàn)癥狀或死亡的小白鼠進(jìn)行剖檢，并采集病料，進(jìn)行分離。 二．結(jié)果與分析 1、培養(yǎng)特性及形態(tài)特征 ①培養(yǎng)特性 在37℃條件下，需氧與厭氧培養(yǎng)的血液營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板均長(zhǎng)出光滑、濕潤(rùn)、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，并且有β溶血現(xiàn)象。 ②鏡檢結(jié)果 顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，排列成葡萄串狀，也有個(gè)別2個(gè)或3個(gè)球菌相連。根據(jù)菌落形態(tài)、鏡檢結(jié)果懷疑該菌為葡萄球菌。 2、菌落計(jì)數(shù)報(bào)告【doc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法 將直接計(jì)數(shù)法試驗(yàn)中的3個(gè)平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性數(shù)，除以5，在乘以稀釋倍數(shù)，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)量。 3、動(dòng)物感染試驗(yàn) 只注生理鹽水的小白鼠沒(méi)有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內(nèi)死亡。將死亡的小白鼠剖檢采集病料，進(jìn)行細(xì)菌分離和生化試驗(yàn)，得到與原分離菌。 【doc】金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法

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