日本黄色小说视频,日韩在线一区二区三区免费视频,亚洲电影在线,精品欧美日韩一区二区三区,久久香蕉国产线看观看亚洲卡,美女浴室,美女脱衣诱惑

【DOC】微生物限度檢查法 - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者：張琳琳1
資源分類：醫(yī)學(xué) - 檢驗科
資源屬性：文檔
資源售價：1 愛醫(yī)幣
資源大?。?.53M
關(guān)注入數(shù)：458 人次
評論人數(shù)：0 人
下載人數(shù)：2人
上傳日期：2013-01-05 14:21:56

中國藥典（2010版）微生物檢測 微生物限度檢查法 微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。 微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》 的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。 供試品檢查時．如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑，應(yīng)證明其有效性及對微生物無毒性。 除另有規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為30～35 ℃ ；霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23～28 ℃ 。 檢驗結(jié)果以1g 、lml 、10g 、l0ml 或10cm2 為單位報告，特殊品種可以最小包裝單位報告。 檢驗量 檢驗量即一次試驗所用的供試品量（g 、ml 或cm2）。 除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗量為10g 或10ml；膜劑為100 cm2；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。要求檢查沙門菌的供試品，其檢驗量應(yīng)增加20g 或20ml （其中10g或10ml 用于陽性對照試驗）。 檢驗時,應(yīng)從2 個以上最小包裝單位中抽取供試品，膜劑還不得少于4 片。 一般應(yīng)隨機抽取不少于檢驗用星（兩個以上最小包裝單位）的3 倍最供試品。 供試液的制備 根據(jù)供試品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃ 。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過1 小時。 除另有規(guī)定外，常用的供試液制備方法如下。 1.液體供試品 取供試品10ml ，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml ，混勻，作為l:10 的供試液。油劑可加入適量的無菌聚山梨酯80 使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。 2.固體、半固體或黏稠性供試品 取供試品10g ，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至1OOml ，用勻漿儀或其他適宜的方法，混勻，作為1:10 的供試液。必要時加適量的無菌聚山梨酯80 ，并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。 3.需用特殊方法制備供試液的供試品 （1）非水溶性供試品 方法1 ??取供試品5g（或5ml ) ，加至含溶化的（溫度不超過45℃ ）5g司盤80 、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80 無菌混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌成團后，慢慢加人45 ℃ 的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml ，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1 : 20 的供試液。 方法2 取供試品10g ，加至含20ml 無菌十四烷酸異丙酯（制法見附錄XII A 無菌檢查法中供試品的無菌檢查項下）和無菌玻璃珠的適宜容器中．必要時可增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45 ℃ 的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10Oml ，振搖5～10 分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為l : 10 的供試液。 （2）膜劑供試品 取供試品100cm2，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml （必要時可增加稀釋液），浸泡，振搖，作為1:10 的供試液。 （3）腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品 取供試品10g ，加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或pH7.6 無菌磷酸鹽緩沖液（用于結(jié)腸溶制劑）至100ml ，置45 ℃ 水浴中，振搖，使溶解，作為1 :10 的供試液。 （4）氣霧劑、噴霧劑供試品 取規(guī)定量供試品，置冰凍室冷凍約1 小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無菌注射器吸出全部藥液，加至適量的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適覺的無菌聚山梨酯80 ）中，混勻，取相當(dāng)于10g或10ml 的供試品，再稀釋成1:10 的供試液。 （5）貼劑供試品 取規(guī)定量供試品，去掉貼劑的保護(hù)層，放置在無菌玻璃或塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布）覆蓋貼劑的粘貼面，以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀釋劑中，用力振蕩至少30 分鐘，制成供試液。貼劑也可采用其他適宜的方法制備成供試液。 （6）具抑菌活性的供試品 當(dāng)供試品有抑菌活性時，采用下列方法進(jìn)行處理，以消除供試液的抑菌活性，再依法檢查。常用的方法如下。 ① 培養(yǎng)基稀釋法?? 取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少，至不含抑菌作用。測定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時，取同稀釋級的供試液2ml ，每1ml供試液可等量分注多個平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計數(shù)。每1ml供試液所注的平皿中生長的菌落數(shù)之和即為1ml的菌落數(shù)，計算每1ml供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計數(shù)規(guī)則報告菌數(shù)；控制菌檢查時，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。 ② 離心沉淀法?? 取一定量的供試液，500 轉(zhuǎn)／分鐘離心3 分鐘，取全部上清液混合。用于細(xì)菌檢查。 ③ 薄膜過濾法?? 見細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)項下的“薄膜過濾法”。 ④ 中和法?? 凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養(yǎng)基中。 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù) 計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。 菌種?? 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代（從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。 大腸埃希菌（Escherichia coli[CMCC ( B ) 44l02] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[ CMCC ( B ) 26003 ] 枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis ?) [ CMCC ( B ) 63501 ] 白色念珠菌（Candida albicans ）〔 CMCC ( F ) 98001 〕 黑曲霉（Aspergillus niger) [ CMCC ( F ) 98003 ] 菌液制備? 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18 ～24 小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24～48 小時。上述培養(yǎng)物用0 . 9 ％無菌氯化鈉溶液制成每lml 含菌數(shù)為50～100CFU 的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5 ～7 天，加人3 ～5ml 含0.05 % ( ml /ml ）聚山梨酯80 的0.9 ％無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05 % ( ml / ml ）聚山梨酯80 的0.9％無菌氯化鈉溶液制成每lml 含孢子數(shù)50 ～ 100CFU 的孢子懸液。 菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時內(nèi)使用；若保存在2～8 ℃ ，可在24 小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2 ～8 ℃ ，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。 適用性檢查 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌各50～100CFU ，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2 個平皿，混勻，凝固，置30～35 ℃ 培養(yǎng)48 小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50～100CFU ，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2 個平皿，混勻，凝固，置23 ～28 ℃ 培養(yǎng)72 小時，計數(shù)；取白色念珠菌50 ～100CFU ，注入無菌平皿中，立即傾注酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基．平行制備2 個平皿，混勻，凝固，置23 ～28 ℃ 培養(yǎng)72 小時，計數(shù)。同時，用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗。 結(jié)果判定? 若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70 % ，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。 計數(shù)方法的驗證 當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時，計數(shù)方法應(yīng)重新驗證。 驗證時，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。對各試驗菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗證。 菌種及菌液制備? 同計數(shù)培養(yǎng)鑒的適用性檢查。 驗證方法 驗證試驗至少應(yīng)進(jìn)行3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 ( l )試驗組?? 平皿法計數(shù)時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液lml 和50 ～100CFU 試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2 個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。薄膜過濾法計數(shù)時，取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加人50～100CFU 試驗菌，過濾，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。 ( 2 )菌液組?? 測定所加的試驗菌數(shù)。 ( 3 )供試品對照組?? 取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。 ( 4 )稀釋劑對照組?? 若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應(yīng)增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每lml 供試液含50 ～100CFU ，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。 結(jié)果判斷? 在3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70 % 。若試驗組的菌數(shù)回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70％，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌數(shù)回收率低于70 % ，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法（常見干擾物的中和劑或滅活方法見表1 ）等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗證。 表l 常見干擾物的中和劑或滅活方法 干擾物 可選用的中和劑或滅活方法 戊二醛 亞硫酸氫鈉 酚類、乙醇、吸附物 稀釋法 醛類 稀釋法、甘氨酸、硫代硫酸鹽 季銨類化合物（QACs ）、對羥基苯甲酸酯 卵磷脂、聚山梨酯 ? 汞類制劑 亞硫酸氫鈉、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽 雙胍類化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰類 聚山梨酯 鹵化物 硫代硫酸鹽 乙二胺四乙酸（EDTA ) 鎂或鈣離子 磺胺類 對氨基苯甲酸 β-內(nèi)酰胺類抗生素 β-內(nèi)酰胺酶 ? 若沒有適宜的方法消除供試品的抑菌活性，那么驗證試驗中微生物回收的失敗可看成是因供試品的抗菌活性引起的，同時表明該供試品不能被試驗菌污染。但是，供試品也可能僅對試驗用菌株具有抑制作用，而對其他菌株沒有抑制作用。因此，根據(jù)供試品須符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報告規(guī)則，在不影響檢驗結(jié)果判斷的前提下，應(yīng)采用能使微生物生長的更高稀釋級的供試液進(jìn)行方法驗證試驗。若驗證試驗符合要求，應(yīng)以該稀釋級供試液作為最低稀釋級的供試液進(jìn)行供試品檢驗。 計數(shù)方法驗證時，采用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的回收率達(dá)不到要求，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進(jìn)行供試品的檢驗。 驗證試驗也可與供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)同時進(jìn)行。 供試品檢查 計數(shù)方法包括平皿法和薄膜過濾法。檢查時，按已驗證的計數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測定。 按計數(shù)方法的驗證試

立即下載: 【DOC】微生物限度檢查法 - 醫(yī)學(xué)資源下載