【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載
2013-08-04 05:00
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[導(dǎo)讀] 【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載 資源作者:張琳琳1 資源分類:醫(yī)學(xué) - 檢驗(yàn)科 資源屬性:文檔 資源售價(jià):1 愛(ài)醫(yī)幣 資源大?。?.08M 關(guān)注入數(shù):283 人次 評(píng)論人數(shù):0 人
【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者:
張琳琳1 資源分類:
醫(yī)學(xué) -
檢驗(yàn)科 資源屬性:
文檔 資源售價(jià):1 愛(ài)醫(yī)幣
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上傳日期:2013-01-06 10:09:52
臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè)
營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通瓊脂)
成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏湯)?? 100毫升
????? 瓊脂(視天氣,瓊脂質(zhì)量而定)
制法:將上物加熱溶解,補(bǔ)足水,調(diào)ph至7.6,過(guò)濾分裝121℃,高壓滅菌15分鐘。
用途:作普通瓊脂平皿。
?
血瓊脂平板(BA)
制法:取營(yíng)養(yǎng)瓊脂(PH7.6),加熱使其溶解待冷至45-50℃,以滅菌操作于每100毫升營(yíng)養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻,立即傾注于平板或分裝試管,制成斜面?zhèn)溆谩?
用途:1.一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。
????? 2.尿液,膿液
?????3.分離細(xì)菌標(biāo)本用。
?
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (肉膏湯BB)
成份:蛋白胨?10克?????? 牛肉膏??? 5克????
????? 氯化鈉?? 5克??????? 水?????? 1000毫升
制法:將以上各物稱好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,過(guò)濾分瓶,121℃高壓滅菌,20分鐘備用。
用途:1 作耐藥試驗(yàn),增菌用分裝小管。
????? 2 作普通瓊脂斜面。
?
血液培養(yǎng)基(大管肉湯培養(yǎng)基)
成份:1?新鮮牛肉浸液??? 1000毫升???
????? 2?PABA(對(duì)氨基苯甲酸[相當(dāng)于10mg/毫升])?? 1g%?1毫升
????? 3?MgSO4?? [相當(dāng)于0.493/100毫升]?????????? 49.3%?1毫升
????? 4?枸椽酸鈉???????????????????????????????????? 0.3g
制法:1?將1號(hào),4號(hào)混合液,2號(hào),3號(hào)液分裝高壓滅菌。
????? 2?取滅菌1,4號(hào)混合液用無(wú)菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行無(wú)菌試驗(yàn)三天方可使用。
用途:作血,骨髓培養(yǎng)用。
?
腸道桿菌培養(yǎng)基(伊紅美蘭瓊脂)
成份:?蛋白胨 ????10克??????????? 乳糖????? 10克
??????? 氯化鈉???? 5克???????????? 瓊脂????? 25(22)克
??????? 水???????? 1000毫升??????? 2%伊紅溶液20毫升
??????? 0.5%美蘭溶液?? 20毫升
制法:將蛋白胨,氯化鈉瓊脂稱好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4過(guò)濾,補(bǔ)足失水,加入2%伊紅溶液20毫升,0.5%美蘭溶液20毫升,(115℃高壓20分鐘),冷卻至50℃左右傾注平板,凝固后存冰箱備用。(高壓以后方可再加乳糖)
?
用途:用作分離沙門氏,志賀氏菌屬,也作菌群調(diào)查。
羅文斯坦培養(yǎng)基
成份:磷酸二氫鉀?? ????2.4克??????? ??????硫酸鎂?? 0.24克
????? 枸椽酸鈉???????? 0.6克????????????? 天門冬素?3.6克
????? 純甘油(丙三醇) 12毫升?? ???????????水??????600毫升
????? 馬鈴薯粉????? ???30克???????? ??????雞蛋??? 1000毫升(約3公斤)
????? 2%孔雀綠水溶液?20毫升??????
制法:1?除雞蛋外(還有孔雀綠)??蓪⑵渌锲贩Q好,放入大三角瓶包扎好,高壓滅菌。
????? 2?雞蛋用75%酒精泡30分鐘,滅菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)充分將雞蛋搖散。
????? 3?將各成份按比例配好,分裝每管約5毫升。
????? 4?間歇滅菌第一次90℃1小時(shí),第二次80℃半小時(shí),第三次80℃半小時(shí)(或放85℃烤箱內(nèi)連續(xù)二次)。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn): 1?滅菌試驗(yàn)合格。
??? ???????2?接種結(jié)核桿菌要求兩星期生長(zhǎng)良好。
用途:作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)用。
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結(jié)核半固體培養(yǎng)基
成份:磷酸氫二鈉??? ??19克??????????? ???硫酸鎂????? 0.6克
????? 磷酸二氫鉀??? ??2.5克?????????? ???天門冬素??? 5克
????? 1%孔雀綠???? ??1.5克?????????? ???甘油???????? 20毫升
????? 吐溫80(10%)?5毫升????????? ???水????????? 1000毫升
????? 枸椽酸鈉??????? 2.5克????????? ????動(dòng)物血清??? 100毫升
????? 瓊脂????????? ??1.5克(80小時(shí)用甲醇去脂)
????? 1%孔雀綠???? ??0.78毫升??????? ??吐溫80(10%) 5毫升
????? 加動(dòng)物血清??? ??100毫升
制法: 1?除血清外將上述藥品均稱好,放入煮沸溶解,調(diào)PH7。2
?????? 2?分管(每管約10毫升)包扎好,高壓,121℃半小時(shí)滅菌。
?????? 3?待冷后無(wú)菌法加無(wú)菌血清(綿羊血或兔血)每管約1毫升備用。
?????? 4?去除瓊脂方法:取瓊脂若干或于三角燒瓶中加甲醇于瓊脂1毫升用塞密封,放37℃溫浴80小時(shí),每天搖動(dòng)一次,冷卻后到時(shí)取出用濾紙過(guò)濾,待瓊脂自然冷卻后備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1無(wú)菌實(shí)驗(yàn)合格。
????????? 2瓊脂硬度合適而清亮。
????????? 3接種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌用,強(qiáng)度合適即可用。
用途:培養(yǎng)結(jié)核桿菌用。
?
亞碲酸鉀血瓊脂平板
成份:瓊脂基礎(chǔ)???? 100毫升???????? 10%葡萄糖????? 2毫升
????? 1%亞碲酸鉀?4.5毫升??????? ??綿羊血?? ??????10毫升
制法:1將瓊脂基礎(chǔ)溶解好,加入羊血。
????? 2馬上加熱使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升與1%亞碲酸4.5毫升混合后倒入無(wú)菌平板,?
??????? 凝固后存冰箱備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):接種白喉?xiàng)U菌生長(zhǎng)良好,其它革蘭氏陰性菌均抑制生長(zhǎng)。
用途:供培養(yǎng)及鑒別白喉?xiàng)U菌用。??????????
??????????
??????????????????????????
米培養(yǎng)基
成份:白米?? ??????20克?????????????? 水????? 1000毫升
????? 瓊脂???????? 20克????????????? 吐溫80?? 10毫升
制法:1將20克米加水200毫升煮沸45分鐘,煮時(shí)將容器蓋好。
????? 2用紗布過(guò)濾,只要米湯,不要飯,加水至1000毫升。
????? 3加瓊脂20克,吐溫-80 10毫升煮溶,分裝中型管(每管約3毫升),包扎好,高壓,121℃半小時(shí),消毒備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1滅菌。
????????? 2要求清亮。
????????? 3接種白色念珠菌17-24小時(shí)生長(zhǎng)良好,并產(chǎn)生厚膜孢子。
用途:培養(yǎng)白色念珠菌用。
?
蛋白胨水培養(yǎng)基
成份:蛋白胨???? 1克????????? 氯化鈉?????? 0.5克
????? 水加至??? 100毫升??????? PH調(diào)至????? 7.8
制法:把以上各物稱好溶于水,調(diào)節(jié)PH7.6分裝消毒備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1?放置37℃無(wú)菌生長(zhǎng)。
????????? 2?接種大腸桿菌24小時(shí)生長(zhǎng)良好。
????????? 3?可作中國(guó)蘭平板基礎(chǔ)液。
????????? 可作靛基質(zhì)基礎(chǔ)液(作此試驗(yàn)需要色氨酸蛋白胨)。
?
血培養(yǎng)基
成份:蛋白胨???? 10克?????????? 牛肉膏????? 5克
????? 氯化鈉???? 5克??????????? 葡萄糖????? 3克
????? 枸椽酸鈉?? 3克??????????? MgSO4。7H2O?20毫升
????? 0.5%PABA?10毫升?????? 酵母浸液?? 10毫升?? 0.2克(2%過(guò)濾)
????? *酚紅0.4%?? 6毫升???????? 水????? 1000毫升
?????? 瓊脂?????? 0.5克??????
*:作大BB,小BB時(shí),不要加酚紅和瓊脂。
制法:1。除PABA、硫酸鎂、酚紅外均稱好煮化調(diào)PH7.4
????? 2。調(diào)好PH后再加酚紅。
????? 3。硫酸鎂、PABA另外無(wú)菌再加入(亞細(xì),小BB)???
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沙氏培養(yǎng)基
成份:蛋白胨????? 1克???????????????????????? 水?????? 100毫升
????? 瓊脂??????? 1.5克(瓊脂粉1克%)????? 葡萄糖或麥芽糖?? 4克
制法:1將上述物質(zhì)稱好,放入水中煮沸溶解(不必調(diào)PH即有5左右)分中號(hào)試管(約4毫升)包扎,高壓115℃20分鐘。
????? 2 趁熱斜好,凝固備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1無(wú)菌試驗(yàn)合格。
????????? 2接種霉菌比在其它培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,其它菌生長(zhǎng)不好。
?用途:作分離培養(yǎng)霉菌用。
注意:1?接種臨床新鮮標(biāo)本可先加1-2滴70%酒精讓干后再接種于含12.5%氯霉素沙氏斜面培養(yǎng)基上。??
???? 2?也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麥芽糖。
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肉渣培養(yǎng)基
成份:牛肉渣???????????? 牛肉浸液(牛肉膏)
制法:將做牛肉浸液的牛肉渣,裝入試管,高約3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏湯(PH7.6)約5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高約0.5厘米(不加也可),121℃高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內(nèi)備用。
用途:用于厭氧菌培養(yǎng)。
注意:如無(wú)肉渣也可用牛、羊血等代替,將血塊先放入水內(nèi)煮沸,取出成小塊,血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。
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單糖發(fā)酵管培養(yǎng)基(半固體)
成份: PH7.6-7.8蛋白胨水???? 1000毫升(0.3克/100毫升)
?????? 1.2%酚紅液????????? 0.4毫升
?????? 瓊脂????????????????? 0.4 - 0.5克
?????? 10%糖或醇??????????? 10毫升
制備:把蛋白胨水,瓊脂加熱溶解,然后加1.2%酚紅液0.4毫升,10%糖10毫升,混勻,分裝試管,每管約2-3毫升,經(jīng)115℃高壓滅菌20分鐘后,分置于試管架上,貼上各類糖或醇類標(biāo)簽備用。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):細(xì)菌發(fā)酵糖類或醇而產(chǎn)生酸,能使培養(yǎng)基PH改變,指示劑由紅變黃色,如因發(fā)酵產(chǎn)生氣體則
????????? 半固體內(nèi)產(chǎn)生氣泡,如有動(dòng)力則半固體由清亮變混濁。
?
明膠培養(yǎng)基
成份:肉浸液??????? 1000毫升(牛肉浸膏5克)
????? 明膠????????? 12克
制法:
?? 100毫升肉浸液中,加入明膠12克,隔水加熱煮化,校正PH7.2,分裝小號(hào)試管,用阿諾氏間歇滅菌80℃30分鐘,連續(xù)3日,或者108℃高壓20分鐘,冷卻,貯存?zhèn)溆谩?
堿性蛋白胨水
成份:
?? 蛋白胨????? 20克?????? ??????氯化鈉????? 5克
?? 硝酸鉀?????? 0.1克????????? 結(jié)晶碳酸鈉(NaclCO3.12H2O)?0.2克
?? 水?????? ???1000毫升
??????????????????????????????????????
制法:將蛋白胨,Nacl,硝酸鉀,結(jié)晶碳酸鈉稱好,溶于1000DW中,校正PH8.4分裝試管,121℃高壓
????? 滅菌15分鐘后備用。
用途:用于霍亂弧菌培養(yǎng)。
?????????????????????????????????????
葡萄糖蛋白胨水(M。V用)
成份:蛋白胨??????? 5克???????????? 葡萄糖???????? 5克
????? K2HPO4 ??????5克????????????? 水????????? 1000毫升
制法:將上述稱好溶解分裝試管,調(diào)PH7.4高壓滅菌115℃滅菌20分鐘,或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管
標(biāo)準(zhǔn):滅菌試驗(yàn)合格。
????? 接種大腸桿菌VP陰性,M陽(yáng)性;接種產(chǎn)氣桿菌
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