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【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載

2013-08-04 05:00 閱讀:334 來(lái)源:愛(ài)愛(ài)醫(yī) 責(zé)任編輯:愛(ài)愛(ài)醫(yī)資源網(wǎng)
[導(dǎo)讀] 【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載 資源作者:張琳琳1 資源分類:醫(yī)學(xué) - 檢驗(yàn)科 資源屬性:文檔 資源售價(jià):1 愛(ài)醫(yī)幣 資源大?。?.08M 關(guān)注入數(shù):283 人次 評(píng)論人數(shù):0 人
【DOC】臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) - 醫(yī)學(xué)資源下載
資源作者:張琳琳1
資源分類:醫(yī)學(xué) - 檢驗(yàn)科
資源屬性:文檔
資源售價(jià):1 愛(ài)醫(yī)幣
資源大小:0.08M
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上傳日期:2013-01-06 10:09:52
臨床微生物室培養(yǎng)基手冊(cè) 營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通瓊脂) 成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏湯)?? 100毫升 ????? 瓊脂(視天氣,瓊脂質(zhì)量而定) 制法:將上物加熱溶解,補(bǔ)足水,調(diào)ph至7.6,過(guò)濾分裝121℃,高壓滅菌15分鐘。 用途:作普通瓊脂平皿。 ? 血瓊脂平板(BA) 制法:取營(yíng)養(yǎng)瓊脂(PH7.6),加熱使其溶解待冷至45-50℃,以滅菌操作于每100毫升營(yíng)養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻,立即傾注于平板或分裝試管,制成斜面?zhèn)溆谩? 用途:1.一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。 ????? 2.尿液,膿液 ?????3.分離細(xì)菌標(biāo)本用。 ? 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (肉膏湯BB) 成份:蛋白胨?10克?????? 牛肉膏??? 5克???? ????? 氯化鈉?? 5克??????? 水?????? 1000毫升 制法:將以上各物稱好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,過(guò)濾分瓶,121℃高壓滅菌,20分鐘備用。 用途:1 作耐藥試驗(yàn),增菌用分裝小管。 ????? 2 作普通瓊脂斜面。 ? 血液培養(yǎng)基(大管肉湯培養(yǎng)基) 成份:1?新鮮牛肉浸液??? 1000毫升??? ????? 2?PABA(對(duì)氨基苯甲酸[相當(dāng)于10mg/毫升])?? 1g%?1毫升 ????? 3?MgSO4?? [相當(dāng)于0.493/100毫升]?????????? 49.3%?1毫升 ????? 4?枸椽酸鈉???????????????????????????????????? 0.3g 制法:1?將1號(hào),4號(hào)混合液,2號(hào),3號(hào)液分裝高壓滅菌。 ????? 2?取滅菌1,4號(hào)混合液用無(wú)菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行無(wú)菌試驗(yàn)三天方可使用。 用途:作血,骨髓培養(yǎng)用。 ? 腸道桿菌培養(yǎng)基(伊紅美蘭瓊脂) 成份:?蛋白胨 ????10克??????????? 乳糖????? 10克 ??????? 氯化鈉???? 5克???????????? 瓊脂????? 25(22)克 ??????? 水???????? 1000毫升??????? 2%伊紅溶液20毫升 ??????? 0.5%美蘭溶液?? 20毫升 制法:將蛋白胨,氯化鈉瓊脂稱好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4過(guò)濾,補(bǔ)足失水,加入2%伊紅溶液20毫升,0.5%美蘭溶液20毫升,(115℃高壓20分鐘),冷卻至50℃左右傾注平板,凝固后存冰箱備用。(高壓以后方可再加乳糖) ? 用途:用作分離沙門氏,志賀氏菌屬,也作菌群調(diào)查。 羅文斯坦培養(yǎng)基 成份:磷酸二氫鉀?? ????2.4克??????? ??????硫酸鎂?? 0.24克 ????? 枸椽酸鈉???????? 0.6克????????????? 天門冬素?3.6克 ????? 純甘油(丙三醇) 12毫升?? ???????????水??????600毫升 ????? 馬鈴薯粉????? ???30克???????? ??????雞蛋??? 1000毫升(約3公斤) ????? 2%孔雀綠水溶液?20毫升?????? 制法:1?除雞蛋外(還有孔雀綠)??蓪⑵渌锲贩Q好,放入大三角瓶包扎好,高壓滅菌。 ????? 2?雞蛋用75%酒精泡30分鐘,滅菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶?jī)?nèi)充分將雞蛋搖散。 ????? 3?將各成份按比例配好,分裝每管約5毫升。 ????? 4?間歇滅菌第一次90℃1小時(shí),第二次80℃半小時(shí),第三次80℃半小時(shí)(或放85℃烤箱內(nèi)連續(xù)二次)。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn): 1?滅菌試驗(yàn)合格。 ??? ???????2?接種結(jié)核桿菌要求兩星期生長(zhǎng)良好。 用途:作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)用。 ? 結(jié)核半固體培養(yǎng)基 成份:磷酸氫二鈉??? ??19克??????????? ???硫酸鎂????? 0.6克 ????? 磷酸二氫鉀??? ??2.5克?????????? ???天門冬素??? 5克 ????? 1%孔雀綠???? ??1.5克?????????? ???甘油???????? 20毫升 ????? 吐溫80(10%)?5毫升????????? ???水????????? 1000毫升 ????? 枸椽酸鈉??????? 2.5克????????? ????動(dòng)物血清??? 100毫升 ????? 瓊脂????????? ??1.5克(80小時(shí)用甲醇去脂) ????? 1%孔雀綠???? ??0.78毫升??????? ??吐溫80(10%) 5毫升 ????? 加動(dòng)物血清??? ??100毫升 制法: 1?除血清外將上述藥品均稱好,放入煮沸溶解,調(diào)PH7。2 ?????? 2?分管(每管約10毫升)包扎好,高壓,121℃半小時(shí)滅菌。 ?????? 3?待冷后無(wú)菌法加無(wú)菌血清(綿羊血或兔血)每管約1毫升備用。 ?????? 4?去除瓊脂方法:取瓊脂若干或于三角燒瓶中加甲醇于瓊脂1毫升用塞密封,放37℃溫浴80小時(shí),每天搖動(dòng)一次,冷卻后到時(shí)取出用濾紙過(guò)濾,待瓊脂自然冷卻后備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1無(wú)菌實(shí)驗(yàn)合格。 ????????? 2瓊脂硬度合適而清亮。 ????????? 3接種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核桿菌用,強(qiáng)度合適即可用。 用途:培養(yǎng)結(jié)核桿菌用。 ? 亞碲酸鉀血瓊脂平板 成份:瓊脂基礎(chǔ)???? 100毫升???????? 10%葡萄糖????? 2毫升 ????? 1%亞碲酸鉀?4.5毫升??????? ??綿羊血?? ??????10毫升 制法:1將瓊脂基礎(chǔ)溶解好,加入羊血。 ????? 2馬上加熱使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升與1%亞碲酸4.5毫升混合后倒入無(wú)菌平板,? ??????? 凝固后存冰箱備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):接種白喉?xiàng)U菌生長(zhǎng)良好,其它革蘭氏陰性菌均抑制生長(zhǎng)。 用途:供培養(yǎng)及鑒別白喉?xiàng)U菌用。?????????? ?????????? ?????????????????????????? 米培養(yǎng)基 成份:白米?? ??????20克?????????????? 水????? 1000毫升 ????? 瓊脂???????? 20克????????????? 吐溫80?? 10毫升 制法:1將20克米加水200毫升煮沸45分鐘,煮時(shí)將容器蓋好。 ????? 2用紗布過(guò)濾,只要米湯,不要飯,加水至1000毫升。 ????? 3加瓊脂20克,吐溫-80 10毫升煮溶,分裝中型管(每管約3毫升),包扎好,高壓,121℃半小時(shí),消毒備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1滅菌。 ????????? 2要求清亮。 ????????? 3接種白色念珠菌17-24小時(shí)生長(zhǎng)良好,并產(chǎn)生厚膜孢子。 用途:培養(yǎng)白色念珠菌用。 ? 蛋白胨水培養(yǎng)基 成份:蛋白胨???? 1克????????? 氯化鈉?????? 0.5克 ????? 水加至??? 100毫升??????? PH調(diào)至????? 7.8 制法:把以上各物稱好溶于水,調(diào)節(jié)PH7.6分裝消毒備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1?放置37℃無(wú)菌生長(zhǎng)。 ????????? 2?接種大腸桿菌24小時(shí)生長(zhǎng)良好。 ????????? 3?可作中國(guó)蘭平板基礎(chǔ)液。 ????????? 可作靛基質(zhì)基礎(chǔ)液(作此試驗(yàn)需要色氨酸蛋白胨)。 ? 血培養(yǎng)基 成份:蛋白胨???? 10克?????????? 牛肉膏????? 5克 ????? 氯化鈉???? 5克??????????? 葡萄糖????? 3克 ????? 枸椽酸鈉?? 3克??????????? MgSO4。7H2O?20毫升 ????? 0.5%PABA?10毫升?????? 酵母浸液?? 10毫升?? 0.2克(2%過(guò)濾) ????? *酚紅0.4%?? 6毫升???????? 水????? 1000毫升 ?????? 瓊脂?????? 0.5克?????? *:作大BB,小BB時(shí),不要加酚紅和瓊脂。 制法:1。除PABA、硫酸鎂、酚紅外均稱好煮化調(diào)PH7.4 ????? 2。調(diào)好PH后再加酚紅。 ????? 3。硫酸鎂、PABA另外無(wú)菌再加入(亞細(xì),小BB)??? ? 沙氏培養(yǎng)基 成份:蛋白胨????? 1克???????????????????????? 水?????? 100毫升 ????? 瓊脂??????? 1.5克(瓊脂粉1克%)????? 葡萄糖或麥芽糖?? 4克 制法:1將上述物質(zhì)稱好,放入水中煮沸溶解(不必調(diào)PH即有5左右)分中號(hào)試管(約4毫升)包扎,高壓115℃20分鐘。 ????? 2 趁熱斜好,凝固備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):1無(wú)菌試驗(yàn)合格。 ????????? 2接種霉菌比在其它培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,其它菌生長(zhǎng)不好。 ?用途:作分離培養(yǎng)霉菌用。 注意:1?接種臨床新鮮標(biāo)本可先加1-2滴70%酒精讓干后再接種于含12.5%氯霉素沙氏斜面培養(yǎng)基上。?? ???? 2?也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麥芽糖。 ? 肉渣培養(yǎng)基 成份:牛肉渣???????????? 牛肉浸液(牛肉膏) 制法:將做牛肉浸液的牛肉渣,裝入試管,高約3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏湯(PH7.6)約5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高約0.5厘米(不加也可),121℃高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內(nèi)備用。 用途:用于厭氧菌培養(yǎng)。 注意:如無(wú)肉渣也可用牛、羊血等代替,將血塊先放入水內(nèi)煮沸,取出成小塊,血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。 ? 單糖發(fā)酵管培養(yǎng)基(半固體) 成份: PH7.6-7.8蛋白胨水???? 1000毫升(0.3克/100毫升) ?????? 1.2%酚紅液????????? 0.4毫升 ?????? 瓊脂????????????????? 0.4 - 0.5克 ?????? 10%糖或醇??????????? 10毫升 制備:把蛋白胨水,瓊脂加熱溶解,然后加1.2%酚紅液0.4毫升,10%糖10毫升,混勻,分裝試管,每管約2-3毫升,經(jīng)115℃高壓滅菌20分鐘后,分置于試管架上,貼上各類糖或醇類標(biāo)簽備用。 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):細(xì)菌發(fā)酵糖類或醇而產(chǎn)生酸,能使培養(yǎng)基PH改變,指示劑由紅變黃色,如因發(fā)酵產(chǎn)生氣體則 ????????? 半固體內(nèi)產(chǎn)生氣泡,如有動(dòng)力則半固體由清亮變混濁。 ? 明膠培養(yǎng)基 成份:肉浸液??????? 1000毫升(牛肉浸膏5克) ????? 明膠????????? 12克 制法: ?? 100毫升肉浸液中,加入明膠12克,隔水加熱煮化,校正PH7.2,分裝小號(hào)試管,用阿諾氏間歇滅菌80℃30分鐘,連續(xù)3日,或者108℃高壓20分鐘,冷卻,貯存?zhèn)溆谩? 堿性蛋白胨水 成份: ?? 蛋白胨????? 20克?????? ??????氯化鈉????? 5克 ?? 硝酸鉀?????? 0.1克????????? 結(jié)晶碳酸鈉(NaclCO3.12H2O)?0.2克 ?? 水?????? ???1000毫升 ?????????????????????????????????????? 制法:將蛋白胨,Nacl,硝酸鉀,結(jié)晶碳酸鈉稱好,溶于1000DW中,校正PH8.4分裝試管,121℃高壓 ????? 滅菌15分鐘后備用。 用途:用于霍亂弧菌培養(yǎng)。 ????????????????????????????????????? 葡萄糖蛋白胨水(M。V用) 成份:蛋白胨??????? 5克???????????? 葡萄糖???????? 5克 ????? K2HPO4 ??????5克????????????? 水????????? 1000毫升 制法:將上述稱好溶解分裝試管,調(diào)PH7.4高壓滅菌115℃滅菌20分鐘,或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管 標(biāo)準(zhǔn):滅菌試驗(yàn)合格。 ????? 接種大腸桿菌VP陰性,M陽(yáng)性;接種產(chǎn)氣桿菌
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