一、脂肪染色:
(一)蘇旦Ⅲ法
試劑配制:
蘇旦Ⅲ0.1-0.2g,70%酒精100ml
將蘇旦Ⅲ置于70%酒精中,加熱飽和,在未冷前過濾,靜置一夜。
染色步驟:
1.細胞涂片。
2.70%酒精固定1分鐘。
3.放入蘇旦Ⅲ酒精溶液中20-30分鐘。
4.70%酒精洗去多余的染料。
5.水洗。
6.蘇木素復(fù)染2-5分鐘。
7.1%鹽酸酒精分化。
8.水洗,藍化,甘油封固。
結(jié)果:脂肪桔黃或紅色。一般用于確定胞漿內(nèi)空泡究竟是糖原,水變性還是脂滴。
(二)蘇丹Ⅳ(猩紅)(Sudan Ⅳ)染色法:
試劑配制:
蘇丹Ⅳ1-2克加純酒精70ml,10%氫氧化鈉20ml,蒸餾水10ml,制成混合液,略加熱,置37℃溫箱中1小時,取出冷卻后過濾,12小時后即可使用。此液5天內(nèi)失效,建議配制70%酒精飽和液。
染色步驟:
1.細胞涂片。
2.70%酒精固定1分鐘。
3.放入蘇旦Ⅳ酒精溶液中20-30分鐘。
4.70%酒精洗去多余的染料。
5.水洗。
6.蘇木素復(fù)染2-5分鐘。
7.1%鹽酸酒精分化。
8.水洗,藍化,甘油封固。
結(jié)果:脂肪呈猩紅色。
(三)油紅染色法:
試劑配制:
油紅O 0.5g,異丙醇100ml,配成飽和液,長期保存?zhèn)溆谩?br />
油紅稀釋液的配制:取油紅飽和液6毫升,加蒸餾水4毫升,靜置5-10分鐘后過濾后使用。
染色步驟:
1.細胞涂片。
2.70%酒精固定1分鐘。
3.蒸餾水洗。
4.油紅稀釋液染10-15分鐘,避光、密封。
5.60%乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰。
6、水洗。
7.Marry氏蘇木素復(fù)染核。
8.水洗。
9.甘油或甘油明膠封片。
結(jié)果:脂肪呈鮮紅色,細胞核呈藍色,間質(zhì)無色。
二、糖原染色
過碘酸-Schiff(PAS)染色法
試劑配制:
堿性品紅1g,活性炭2g,當(dāng)量鹽酸20ml,偏重亞硫酸鈉1.5g
Schiff試劑配制
1.堿性品紅1g,放入200毫升蒸餾水中,煮沸,攪拌,充分溶解。
2.冷卻至50℃時過濾,濾液中加入當(dāng)量鹽酸20毫升。
3.加偏重亞硫酸鈉1.5g,置于暗處過夜。
4.加活性2g,搖晃,過濾,以無色為最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
染色步驟
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2.1%過碘酸水溶液5-10分鐘。
3.蒸餾水洗多次。
4.Schiff液10-15分鐘。
5.0.5%偏重亞硫酸鈉(鉀)水溶液洗2次(1-2分鐘)
6.流水沖洗10分鐘。
7.蘇木素復(fù)染。(1-2分鐘)
8.酒精脫水,二甲苯透明,樹膠封固。
結(jié)果:糖原紅色。
注意:1.陰性對照片用淀粉酶消化處理。
2.糖原容易水解,取材標(biāo)本最好新鮮,不要經(jīng)過水洗。
3.固定液用中性福爾馬林為佳。
4.如Schiff液發(fā)紅,再加入少量偏重亞硫酸鈉,使液體顏色變清后又可使用
三、粘液染色
(一)阿爾辛藍過碘酸雪夫(AB-PAS)染色法
試劑配制:
愛先藍液:愛先藍8GX1g,蒸餾水97ml,冰醋酸3ml
核固紅液:核固紅0.1g,硫酸鋁5g,蒸餾水97ml
堿性品紅1g,活性炭2g,當(dāng)量鹽酸20ml,偏重亞硫酸鈉1.5g
Schiff試劑配制
1.堿性品紅1g,放入200ml蒸餾水中,煮沸,攪拌,充分溶解。
2.冷卻至50℃時過濾,濾液中加入當(dāng)量鹽酸20ml。
3.加偏重亞硫酸鈉1.5g,置于暗處過夜。
4.加活性2g,搖晃,過濾,以無色為最佳。棕色瓶,4℃冰箱保存。
染色步驟
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2.蒸餾水洗
3.3%冰醋酸浸5分鐘
4.愛先藍液染10~20分鐘
5.蒸餾水洗
6.1%過碘酸水溶液5-10分鐘。
7.蒸餾水洗多次。
8.Schiff液10-15分鐘。
9.自來水中浸10分鐘(經(jīng)常換水)。
10.酒精脫水,二甲苯透明,樹膠封固。
結(jié)果:中性粘液呈紅色,酸性粘液物質(zhì)呈藍色。中性與酸性粘液的混合物質(zhì)呈紫紅色。
(二)Southgate胭脂紅染色
試劑配制:
1.Southgate貯備液:胭脂紅1g,無水酒精50ml,蒸餾水50ml升,氫氧化鋁1g,無水氯化鋁0.5g
先將無水酒精和蒸餾水1:1混合,依次加入試劑,攪拌,水浴中煮沸3分鐘,冷至室溫過濾,并用50%酒精加至總量100ml,磨紗瓶冰箱保存。
2.Southgate稀釋液:用前取10ml貯存液加蒸餾水40ml。
染色步驟
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2.蘇木素染5~10分鐘
3.水洗,1%鹽酸酒精分化
4.水洗,藍化
5、蒸餾水洗
6.Southgate稀釋液染30分鐘
7.水洗
8.95%酒精洗二次
9.無水酒精脫水,透明,封固
結(jié)果:酸性粘液呈紅色。
四、淀粉樣蛋白
(一)甲基紫法(Jurgens,1875)
試劑配制:
(1)1%甲基紫水溶液:甲基紫(methyl violet)1g,蒸餾水加至100ml
(2)1%蠟酸水溶液:冰醋酸1ml,蒸餾水99ml
操作方法:
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2、蒸餾水洗
3、1%甲基紫水溶液染3-5分鐘。
4、水洗,在鏡下觀察。
5、1%蠟酸水溶液分化,直至見淀粉樣蛋白呈紫紅色或紅色,胞核呈藍紫色。
6、流水稍沖洗。
用**樹膠封片?;虬淹科匀涣栏珊?,用中性樹膠封固。
結(jié)果:淀粉樣蛋白呈紫紅色至紅色。
注意事項:
1、如無甲基紫,也可用結(jié)晶紫代替,同樣可獲得異色反應(yīng)。
2、染好后的涂片不能用酒精脫水,因為此染料溶于酒精而立即脫色。
3、染好后的涂片也不宜用甘油明膠封蓋。
(二)甲醇剛果紅法(改良的Highman)
(1)甲醇剛果紅液:剛果紅(congo red)0.5g,甲醇80ml,甘油20ml
(2)堿性酒精分化液:氫氧化鉀0.2g,80%酒精100ml
操作方法:
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2、蒸餾水洗
3.甲醇剛果紅染液染10~20分鐘
4.用堿性乙醇分化液分化數(shù)秒
5.水洗
6.蘇木素復(fù)染2分鐘
7.水洗數(shù)分鐘
8.脫水,透明,封固
結(jié)果:淀粉樣物呈桔紅色。
五、含鐵血黃素
普魯士藍反應(yīng):
試劑配制:
1.2%亞鐵氫化鉀水溶液:亞鐵氫化鉀2g,蒸餾水100ml
2.2%鹽酸水溶液:鹽酸2ml,蒸餾水98ml
3.0.1%沙紅(safranine)溶液:沙紅0.1g,蒸餾水100ml
染色步驟
1.細胞涂片,95%酒精固定60分鐘以上。
2、蒸餾水洗
3.取2%亞鐵氫化鉀水溶液和2%鹽酸水溶液等份混合,滴在涂片上,10~20分鐘
4.蒸餾水洗
5.核復(fù)染
6.水洗,脫水,透明,封固
結(jié)果:含鐵血黃素呈藍色。
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