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    反義技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一門治療腫瘤的新技術(shù)，已成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)之一，許多反義藥物已開(kāi)始進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段，并取得了令人滿意的療效。文章主要綜述了反義核酸誘導(dǎo)治療白血病新進(jìn)展。

    腫瘤細(xì)胞因其自身的生長(zhǎng)特性而有一些特異表達(dá)的基因，這些基因在正常細(xì)胞不表達(dá)或表達(dá)程度很低，因而針對(duì)這些基因的反義藥物在治療腫瘤時(shí)對(duì)正常組織不產(chǎn)生或僅產(chǎn)生較小的副作用。目前選擇的抗腫瘤反義藥物的靶點(diǎn)主要有：
    ①癌基因類：c-myc、c-myb，bcl-2，N-Ras，K-Ras，H-Ras，c-un，c-fos，cdc-2，c-mos等。
    ②宿主基因類：如多藥耐藥基因、細(xì)胞周期素、前胸腺素、T細(xì)胞受體、表皮生長(zhǎng)因子受體、蛋白激酶C等。
    ③細(xì)胞因子類：如IL-2，IL-1α，IL-1β等。
    在白血病方面，被研究的基因主要有以下方面。

    1.癌基因類

    1.1 Bcl-2

    目前的研究已表明：bcl-2基因是一個(gè)耐藥和抗凋亡基因。bcl-2蛋白表達(dá)的高低與腫瘤細(xì)胞對(duì)多種化療藥物敏感性密切相關(guān)，bcl-2基因的過(guò)度表達(dá)可明顯降低化療藥物引起的細(xì)胞凋亡。Zhang等將三氧化二砷與bcl-2的反義寡核苷酸聯(lián)用，作用于K562和NB4細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)反義寡核苷酸能明顯促進(jìn)白血病細(xì)胞系對(duì)三氧化二砷的敏感性。

    Bcl-2的過(guò)表達(dá)被認(rèn)為是白血病耐藥、預(yù)后差的重要原因之一，那么，降低bcl-2的表達(dá)，則可部分逆轉(zhuǎn)其耐藥，增加緩解率。根據(jù)這一設(shè)想Marcucci等利用bcl-2反義寡核苷酸藥物G3139進(jìn)行了臨床實(shí)驗(yàn)，病人共20例，包括難治及復(fù)發(fā)的急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓細(xì)胞性白血病。采用G3139與氟達(dá)拉濱、阿糖胞苷及粒細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合用藥，9例病人對(duì)治療有反應(yīng)，其中6例取得完全緩解，3例部分緩解；在12例可評(píng)價(jià)的病人中，9例bcl-2 mRNA水平下調(diào)，此項(xiàng)研究證實(shí)，bcl-2反義寡核苷酸能夠在治療白血病中起到積極作用。已有研究證實(shí)，針對(duì)bcl-2 mRNA翻譯起始部位的反義寡核苷酸（AS-ODN）可抑制許多腫瘤細(xì)胞中bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性。

    1.2 Bcl-xL

    Bcl-x mRNA前體經(jīng)過(guò)不同的剪接可產(chǎn)生兩種不同的mRNA，表達(dá)產(chǎn)物分別為抗凋亡的Bcl-xL和促凋亡的Bcl-xS。近來(lái)的一些研究報(bào)道提出凋亡抑制蛋白Bcl-xL和許多常見(jiàn)惡性腫瘤的化療耐藥有密切關(guān)系。在體外轉(zhuǎn)染針對(duì)Bcl-xL基因的ASODN以后，能夠誘導(dǎo)多種惡性腫瘤細(xì)胞凋亡，或促進(jìn)其對(duì)化療藥物的敏感性。 Broome等進(jìn)行了Bcl-xL的反義寡核苷酸作用于急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞系CEM的研究，經(jīng)反義寡核苷酸干預(yù)18h后，與對(duì)照組相比，CEM細(xì)胞的Bcl-xL蛋白表達(dá)及活細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯降低，聯(lián)合應(yīng)用地塞米松或阿霉素則作用效果更為明顯，結(jié)果證實(shí)Bcl-xL反義寡核苷酸具有細(xì)胞毒活性，能夠增強(qiáng)化療藥物誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞死亡。

    1.3 c-myb

    c-myb基因?qū)儆诎┗虻囊环N，與細(xì)胞周期進(jìn)展有關(guān)。c-myb蛋白水平隨細(xì)胞周期的進(jìn)程而短暫升高。在細(xì)胞終末分化階段c-myb的表達(dá)迅速下降。c-myb的表達(dá)能阻斷正在分化的骨髓細(xì)胞成熟。Luger 等用c-myb的反義寡核苷酸對(duì)部分慢性粒細(xì)胞白血病病人在自體骨髓移植前進(jìn)行骨髓凈化，提取CD34（+）骨髓細(xì)胞，用c-myb的反義寡核苷酸凈化24h（19例）或72h（5例），檢測(cè)c-myb mRNA發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平下降大約50%，細(xì)胞經(jīng)長(zhǎng)期原代培養(yǎng)，檢測(cè)bcr/abl發(fā)現(xiàn)超過(guò)50%的病人取得了完全的凈化，第100d細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，盡管自體移植前100%的病人呈Philadelphia染色體陽(yáng)性，但移植后有6/14的病人有細(xì)胞遺傳學(xué)改變，其中1例獲得完全細(xì)胞遺傳學(xué)緩解，3例Philadelphia（+）病人細(xì)胞降至33%以下，與對(duì)照組相比效果明顯。

    2.凋亡抑制蛋白家族

    腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞的凋亡受阻密切相關(guān)，許多凋亡抑制蛋白（IAP）家族成員已成為基因治療的有效靶點(diǎn)。Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡抑制基因，定位于17q25上，廣泛地表達(dá)于胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類腫瘤細(xì)胞，在正常分化成熟組織中未見(jiàn)表達(dá)。Survivin以細(xì)胞周期依賴特異性表達(dá)于G2/M期，參與有絲分裂過(guò)程中紡錘體的形成，保持有絲分裂的真實(shí)性，從而使細(xì)胞順利通過(guò)G2/M期。研究表明Survivin基因在胚胎發(fā)育及腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要的作用。大多數(shù)白血病細(xì)胞表達(dá)Survivin基因，而正常骨髓細(xì)胞均不表達(dá)Survivin。由于Survivin在腫瘤細(xì)胞中的特異性表達(dá)，使它在理論上成為反義基因治療腫瘤的一個(gè)新靶點(diǎn)。Olie等針對(duì)Survivin mRNA設(shè)計(jì)6條ASODN，然后應(yīng)用熒光定量PCR篩選到下調(diào)mRNA作用最強(qiáng)的ASODN4003。王曉娟等將Survivin基因反義核酸通過(guò)電穿孔的方法轉(zhuǎn)染入白血病細(xì)胞系HL-60，發(fā)現(xiàn)Survivin mRNA的表達(dá)下降，進(jìn)一步與紫杉醇聯(lián)用發(fā)現(xiàn)Survivin反義核酸能夠增加HL-60細(xì)胞的凋亡。

    3.端粒酶

    端粒酶是由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白復(fù)合物，含有端粒重復(fù)序列的模板，能以自身RNA為模板，復(fù)制合成端粒重復(fù)序列，對(duì)維持細(xì)胞的生存起著極其重要的作用。研究表明在人體大部分正常組織中沒(méi)有端粒酶活性表達(dá)，僅在胚胎細(xì)胞、睪丸、卵巢、肝細(xì)胞、造血干細(xì)胞及正常白細(xì)胞等部分細(xì)胞中有端粒酶很弱的表達(dá)，與之相反，約有85%的腫瘤細(xì)胞表達(dá)較高的端粒酶活性。這說(shuō)明端粒酶激活在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中普遍存在，端粒酶可能參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展。端粒酶由三部分組成：人端粒酶催化亞單位（hTERT），人端粒RNA（hTR），端粒酶相關(guān)蛋白（TP1）。Yuan等將端粒酶HTERT反義寡核苷酸與CDDP 聯(lián)合作用于HL-60 及K562細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)該反義寡核苷酸能增加HL-60及K562對(duì)CDDP的敏感性，誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞系的凋亡。之后，他們又對(duì)急性及慢性髓細(xì)胞性白血病病人的白血病細(xì)胞進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也證實(shí)端粒酶HTERT反義寡核苷酸能夠促進(jìn)白血病細(xì)胞對(duì)CDDP的敏感性。

    4.蛋白激酶C

    蛋白激酶C（PKC）是絲-蘇氨酸蛋白酶家族，參與信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，調(diào)控生長(zhǎng)因子應(yīng)答，控制細(xì)胞增殖和凋亡，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。因此，PKC成為抗腫瘤治療的靶點(diǎn)。Thonel A等用蛋白激酶C反義核苷酸作用于AML細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)單獨(dú)應(yīng)用反義核酸對(duì)白血病細(xì)胞作用有限，但如果與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用卻能取得讓人滿意的結(jié)果。

    5.耐藥基因類

    腫瘤細(xì)胞耐藥是化療失敗的一個(gè)重要原因，各方學(xué)者都在探討逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的方法，這些方法多在P-gp水平起作用，且副作用較大。從基因水平逆轉(zhuǎn)其耐藥便成為研究熱點(diǎn)方向。多藥耐藥基因（MDR1）在腫瘤耐藥中起了重要的作用。Wei等試驗(yàn)用反義技術(shù)逆轉(zhuǎn)其耐藥，他們采用耐阿霉素的K562細(xì)胞（K562/ADM）系作為研究對(duì)象，以針對(duì)MDR1的核酸肽和反義寡核苷酸作用于K562/ADM，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)的核酸肽和反義寡核苷酸對(duì)K562/ADM的增殖沒(méi)有抑制作用，而與阿霉素共同作用時(shí)則產(chǎn)生明顯的抑制作用，K562/ADM細(xì)胞內(nèi)阿霉素的濃度明顯增高，P-gp表達(dá)下調(diào)。

    6.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

    血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是一種促血管形成因子，在體外能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，在體內(nèi)能夠促進(jìn)血管新生。血液系統(tǒng)腫瘤也存在血管新生現(xiàn)象，瘤細(xì)胞過(guò)量表達(dá)VEGF，骨髓微血管密度增加。研究顯示VEGF能促進(jìn)白血病的發(fā)生發(fā)展，還與預(yù)后有關(guān)。因此抑制VEGF表達(dá)可能成為血液腫瘤治療的一項(xiàng)新措施。Ruan等分別將VEGF正義核苷酸與反義核苷酸轉(zhuǎn)染入白血病細(xì)胞系K562，檢測(cè)細(xì)胞的增殖與凋亡，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染反義核苷酸的K562細(xì)胞VEGF分泌下降49%，而轉(zhuǎn)染正義核苷酸的K562細(xì)胞VEGF分泌上升3倍；他們還進(jìn)一步進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，將轉(zhuǎn)染反義核苷酸的K562細(xì)胞接種至裸鼠，結(jié)果腫瘤微血管密度較對(duì)照組減低，而且如果在INFα存在的情況下細(xì)胞凋亡加速。

    7.細(xì)胞周期類

    細(xì)胞周期素（cyclins）是特定時(shí)相短暫出現(xiàn)的基因表達(dá)產(chǎn)物，是細(xì)胞周期素依賴性激酶（CDK）的基本激活亞基，對(duì)細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞周期調(diào)控點(diǎn)（cell-cycle checkpoints）的調(diào)節(jié)上起關(guān)鍵性作用。目前已發(fā)現(xiàn)Cyclin A-I 9個(gè)成員。細(xì)胞周期的紊亂將導(dǎo)致無(wú)限制的細(xì)胞分化，這是腫瘤發(fā)生的原因之一。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在體外以脂質(zhì)體作為載體將細(xì)胞周期素A （Cyclin A）反義核苷酸轉(zhuǎn)染入白血病細(xì)胞系HL-60細(xì)胞，HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)較對(duì)照組明顯降低，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡特征。cyclin G1作為一種新的細(xì)胞周期素，在細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程中起著一定作用。利用細(xì)胞周期素G1（cyclin G1）反義硫代脫氧寡核苷酸對(duì)HL-60細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的抑制作用研究發(fā)現(xiàn)，cyclin G1蛋白的表達(dá)明顯下降，裸鼠體內(nèi)HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)受抑，且有部分細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。

    近十幾年來(lái)，反義技術(shù)的迅速發(fā)展，已成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一，許多反義藥物已進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)，并取得了一定的療效，這為白血病以及其他惡性腫瘤的診治帶來(lái)了新的希望。但同時(shí)我們也應(yīng)看到反義治療技術(shù)還處在起步階段，還存在不少問(wèn)題，比如轉(zhuǎn)染效率不夠高，特異性及穩(wěn)定性還有待解決等。我們有理由相信，隨著科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，這些問(wèn)題將被逐步解決，由于反義技術(shù)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，它必將成為治療腫瘤的有力手段。